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Cygnus新品上市 | Protein L残留检测试剂盒

Cygnus新推出的Protein L Mix-N-Go™ ELISA试剂盒采用了特有的一步法样本处理方法，可准确评估抗体片段药物中残留的蛋白L杂质，缩短检测时间，提高蛋白L检测结果的可靠性。 更多>

白蛋白与白蛋白融合蛋白的亲和层析纯化

人血清白蛋白 人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA）是血浆中含量最丰富的蛋白质，占血浆蛋白的40-60%，半衰期长达20天，具有重要的生理学和药理学功能，能维持血液正常的渗透压，稳定电解质和酸碱平衡，参与物质运输。在临床上，人血清白蛋白一直被誉为“黄金救命药”，主要用于手术输血和危重病人的补液、治疗创伤或烧伤引起的休克、治疗低白蛋白血症等。 人血白蛋白（图片来源于网络） 人血清白蛋白在临床上使用量很大，通常每剂量高达10g。而市售的治疗性人血白蛋白多数来源于血浆，经冷乙醇沉淀、柱层析、过滤等多种技术结合的方式纯化获得。由于人血浆来源有限、动物源性污染风险高，近年来，全球范围内很多公司和实验室都在尝试采用基因工程的手段来制备重组人血清白蛋白（Recombinant Human Serum Albumin，rHSA），2024年4月8日，通化安睿特生物制药股份有限公司自主研发的重组人白蛋白注射液，完成在俄罗斯的注册，成功获得欧亚经济联盟-俄罗斯联邦卫生部批准上市，成为全球首个获批上市的治疗性重组人血清白蛋白产品，极大推动了全球生物医药产业的发展。 人血清白蛋白由585个氨基酸残基构成，无糖基化，分子量约66kDa，亲水性较高，分子中包含3个结构域（Domains）和35个半胱氨酸残基，组成17对分子内二硫键和一个游离的半胱氨酸残基，确保了其结构域的刚性特点。Mimetic Blue® SA HL P6XL层析填料 Mimetic Blue® SA HL P6XL是Astrea Bioseparations公司推出的白蛋白亲和层析填料，填料基架是粒径均一的交联琼脂糖，配基是合成的蒽醌化合物，可以特异性结合白蛋白，用于血浆来源的白蛋白或重组白蛋白的捕获。Mimetic Blue® SA HL P6XL的性能参数如下表所示。 Mimetic Blue® SA HL P6XL亲和层析填料具有良好的化学稳定性，如图1所示，将填料浸泡于不同pH的试剂中，测试3个月，在pH 3-13的范围内，填料无明显配基脱落，结合效果良好，除此之外，Mimetic Blue® SA HL P6XL亲和层析填料与常见的变性剂如尿素和盐酸胍、表面活性剂、还原剂等兼容性良好。基于其良好的化学稳定性，Mimetic Blue® SA HL P6XL亲和层析填料可高效重复使用，在超过100个批次（>100 cycles）重复使用后，仍保持卓越的结合载量和纯化效果。 图1. Mimetic Blue® SA HL P6XL的pH耐受性测试 在一项测试中，研究人员将未经处理的人源性血清直接上样到装有Mimetic Blue® SA HL P6XL填料的层析柱中，层析工艺参数如下表所示： 由图2的层析图谱和图3的SDS-PAGE检测结果可以看出，Mimetic Blue® SA HL P6XL可以选择性的结合人血清中的白蛋白，其他蛋白随流穿液离开层析柱，洗脱液中白蛋白纯度高达96%，回收率高于90%。 图2. Mimetic Blue® SA HL P6XL捕获血浆来源白蛋白的层析图谱 图3. SDS-PAGE检测结果（Lane 1: molecular weight marker; Lane 2: load; Lane 3: flow through; Lane 4: elution）Mimetic Blue® SA HL P6XL订购信息 散装填料 预装柱 白蛋白融合蛋白白蛋白融合蛋白示意图（图片来源于网络）白蛋白融合蛋白（rHSA Fusion Proteins）是将目的蛋白与白蛋白进行融合表达的蛋白质，可延长目的蛋白在体内的半衰期，在生物医药领域中具有广泛的应用价值。早在1992年，欧洲科学家就尝试将白蛋白和CD4蛋白基因融合后在酵母体系中表达，用于HIV的治疗。2014年，GSK公司推出一种GLP-1受体激动剂阿必鲁肽（Albiglutide），用于治疗2型糖尿病，该药物是将两个GLP-1串联后与rHSA融合，具有长效性，仅需每1-2周注射一次，可有效帮助患者管理其血糖水平。2016年，CSL Bering公司Idelvion经FDA批准上市，该产品是凝血因子IX和rHSA的融合蛋白，在血液中半衰期更长，用于治疗B型血友病。此外，还有很多其他类型的白蛋白融合蛋白正处于临床试验阶段，例如，生长因子-rHSA融合蛋白、白介素2-rHSA融合蛋白、抗体片段-rHSA融合蛋白（如scFv-rHSA融合蛋白）、干扰素α-2b-rHSA融合蛋白等。AlbuPure®层析填料 AlbuPure®是Astrea Bioseparations和Albumedix公司合作开发的白蛋白亲和层析填料，填料基架是粒径均一的高交联琼脂糖，配基是合成的三嗪化合物，具体高流速、高动态结合载量、强化学耐受性等特点，主要用于白蛋白融合蛋白的纯化。AlbuPure®的性能参数如下表所示。 AlbuPure®具有卓越的白蛋白融合蛋白结合性能，如图4所示，研究人员在不同pH值不同流速的上样条件下，探究了AlbuPure®对scFv-rHSA的动态结合载量，结果表明，在pH=4.5，240cm/h线性流速下，AlbuPure®对目标融合蛋白的动态结合载量最佳，10%流穿时，载量高达38.4mg/mL。 图4. AlbuPure®动态结合载量研究与Mimetic Blue® SA HL P6XL类似，AlbuPure®亲和层析填料也具有优秀的化学稳定性，可耐受1M NaOH溶液的清洁，对常见的变性剂、表面活性剂、还原剂等兼容性良好。 在一项研究测试中，研究人员使用酵母体系表达Anti-HIV gp41-rHSA融合蛋白（72kDa），收获液经澄清后，上样到装有AlbuPure®的层析柱中，层析工艺参数如下表所示： 由图5的层析图谱和图6的SDS-PAGE检测结果可知，AlbuPure®可以高效捕获Anti-HIV gp41-rHSA融合蛋白，杂质蛋白在上样时流穿，经过三次不同pH值下的淋洗步骤，可进一步去除少量挂柱的杂质蛋白，目标融合蛋白最后由辛酸钠洗脱下柱，纯度极高。 图5. AlbuPure®纯化Anti-HIV gp41-rHSA融合蛋白的层析图谱图6. SDS-PAGE检测结果 Lane: 1. Load (diluted); Lane 2: FT (neat); Lane 3: post load wash (neat); Lane 4: wash 1 (neat); Lane 5: wash 2 (neat); Lane 6: wash 3 (neat); Lane 7: elution (diluted); Lane 8: elution (10 fold dilution of lane 7); Lane 9: human albumin standard (1µg)AlbuPure®订购信息 散装填料 预装柱 如您对上述产品感兴趣，欢迎点击这里填写信息，Astrea Bioseparations技术专家将为您提供个性化优化方案，切实帮您解决纯化工艺中的疑难问题。 Astrea Bioseparations于1987年孵化自剑桥大学，拥有超过30年层析介质研发和生产经验，是世界级层析介质产品与服务供应商。目前使用Astrea的产品已有超过21个生产工艺通过了FDA和EMA的批准。Astrea Bioseparations在全球拥有3个研发和生产基地，专注为生物大分子和CGT领域提供行业领先的层析介质和技术服务。Astrea Bioseparations推出的基于纳米纤维的新型层析技术，解决了传统生物分离工具载量低和工艺耗时问题，实现更快、更环保、更具成本效益的纯化过程，完全符合当今生物治疗创新的需求。 太阳集团tcy8722是Astrea Bioseparations中国区代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎随时拨打太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多信息。参考文献 1. 血清白蛋白的生物学特性研究进展，生命科学，第25卷，第10期，2013年10月 2.人血清白蛋白纯化技术研究进展，生物工程学报，18卷6期，2002年11月 3. 人血清白蛋白融合技术在药物长效化改造中的应用，生命科学，第27卷，第9期，2015年9月 4. R. Raoufinia et al., Overview of Albumin and Its Purification Methods, 2016 5. M. Sanches et al., AlbuCORE: an albumin-based molecular scaffold for multivalent biologics design, 2020 6. Technical User Guide: Mimetic Blue® SA HL P6XL, Astrea Bioseparations 7. Application Note: Capture and purification of human serum albumin from human source plasma using Mimetic Blue® SA HL P6XL, Astrea Bioseparations 8. Technical User Guide: AlbuPure®, Astrea Bioseparations 9. Technical Note: Capture and purification of recombinant albumin-fusion proteins using AlbuPure®, Astrea Bioseparations 更多>

HCPure™多模式层析填料，助力生物制品的高效纯化

近年来，生物制药行业呈现出繁荣发展的趋势，很多大分子生物制品已经过监管部门批准上市，另有不少创新型大分子正处于临床后期或上市前申报阶段，即将为患者带来福音。例如，基于CHO细胞表达的单克隆抗体、基于大肠杆菌（E.coli）体系表达的重组蛋白或纳米抗体、基于HEK293细胞或昆虫细胞SF9表达的腺相关病毒（AAV）、基于酵母细胞表达的病毒样颗粒（VLP）等。不同于传统的小分子化学药，生物大分子的表达体系更为复杂，杂质种类更多（如宿主蛋白（HCP）和宿主DNA残留(HCD)等），杂质结构相对复杂，这给下游纯化带来了极大的挑战。 基于传统微球技术的层析工艺是生物大分子纯化的重要手段，其具有工艺性能稳定、放大性良好等优点。近年来，多模式层析填料受到越来越多的关注。多模式层析填料往往具备至少两种相互作用机制，其中最常见的是将离子交换模式与疏水相互作用模式结合，可以在广泛的pH和电导率范围内有效纯化目标分子。图1. HCPureTM配基结构和作用方式 HCPureTM是英国Astrea Bioseparations公司2023年推出的多模式层析填料，填料基架为粒径均一的高交联琼脂糖，基架上修饰有化学合成的小分子配基（图1），主要以疏水相互作用的方式结合料液中的杂质，同时兼具氢键相互作用模式（与市售主流产品作用原理不同，形成互补），适用于多种表达体系，在广泛的上样条件下，能稳健的去除料液中的HCP（宿主细胞蛋白）、HCD（宿主细胞DNA）、聚集体、分子片段等工艺或产品相关杂质。表1展示了HCPureTM在常见的表达体系中杂质去除能力。表1. HCPureTM在多种表达体系中的应用效果 1. HCPureTM在大肠杆菌（E. coli ）表达体系中可以有效去除HCP在该应用案例中，研究人员使用大肠杆菌（E. coli ）表达纳米抗体Vκ，收获液先经过Protein L亲和层析纯化，洗脱液经中和后调节成不同的pH（6.0-8.0）和电导率（6-18mS/cm），随后以流穿模式上样HCPureTM，收集流穿液和淋洗液，检测Vκ和HCP的含量，以探究HCPureTM的最佳上样条件。测试条件如下表所示： 图2. E.coli表达体系中HCPureTM上样pH和电导率的探究 由图2的检测结果可知，在较低的pH（6.0）和较低的电导率（6ms/cm）上样条件下，HCP的去除效果最佳，同时目标分子Vκ的回收率最高。在最优上样条件下，料液中的HCP可以从30000ppm降至200ppm（2个log值的去除能力），Vκ回收率大于85%（表2）。表2. HCPureTM在E. coli 表达体系中可以有效去除HCP 2. HCPureTM在CHO细胞表达体系中可以有效去除HCP在该应用案例中，研究人员使用CHO细胞表达IgG型单克隆抗体，澄清后的收获液先经过Protein A亲和层析纯化，洗脱液经中和后调节成不同的pH（4.0-9.0）和电导率（8-18ms/cm），再以流穿模式上样到HCPureTM中，收集流穿液和淋洗液，检测IgG和HCP含量，其中，pH 6.0、电导率12ms/cm是未经调节的亲和层析洗脱中和液。表3. CHO细胞体系中，不同上样pH和电导率条件下，HCPureTM均可有效去除HCP 由表3的检测结果可知，在广泛的上样pH和电导率范围内，HCPureTM均可有效的去除上样料液中的HCP（平均84%），同时保持目标分子的高回收率（平均87%）。此外，由于pH 6.0、电导率12mS/cm是初始的亲和层析洗脱中和液，因此，亲和层析后，料液可不经过调整或缓冲液置换，直接上样到HCPureTM中，同样保持优秀的回收率和HCP去除效果，且大大节约了工艺时间和成本。 3. HCPureTM在CHO细胞表达体系中可以有效去除聚集体在该应用案例中，研究人员使用CHO细胞表达IgG型单克隆抗体，料液经过Protein A亲和层析和阳离子交换层析纯化后，在较低的pH和较高的电导率条件下孵育，诱导产生高含量的聚集体，再以流穿模式上样HCPureTM，收集流穿液和淋洗液，检测聚集体含量。表4. HCPureTM可显著去除抗体料液中的聚集体 由检测结果（表4）可看出，料液经过HCPureTM纯化后，聚集体由初始的6.7%降低到2.9%，HCPureTM可显著去除料液中的聚集体。 4. HCPureTM在HEK 293细胞表达体系中可以有效去除HCP在该应用案例中，研究人员使用HEK293细胞以瞬转的方式表达2型腺相关病毒（AAV-2），病毒载体经过亲和层析纯化后，仍含有较高含量的低分子蛋白杂质，将亲和层析洗脱液置换到PBS+200mM NaCl（pH 7.5）中，以流穿模式上样到HCPureTM（10mm内径层析柱，柱高10cm），总上样量为5.0E+13VP，收集流穿液和淋洗液进行分析。图3. SDS-PAGE检测结果 表5. ELISA检测结果 由SDS-PAGE结果（图3）可看出，流穿液中包含大部分病毒衣壳蛋白VP1，VP2和VP3条带（8-13泳道），而再生液（14泳道）中则包含大量的低分子蛋白杂质条带，表明HCPureTM可以有效去除料液中的蛋白杂质分子。由ELISA检测结果（表5）可知，流穿液中的病毒衣壳蛋白几乎全部回收（接近100%），表明HCPureTM在去除蛋白杂质的同时可以保持优秀的AAV回收率。 HCPureTM多模式层析填料技术参数 HCPureTM多模式层析填料产品信息散装填料 预装柱 如您对上述产品感兴趣，欢迎点击这里填写信息，Astrea Bioseparations技术专家将为您提供个性化优化方案，切实帮您解决纯化工艺中的疑难问题。 Astrea Bioseparations于1987年孵化自剑桥大学，拥有超过30年层析介质研发和生产经验，是世界级层析介质产品与服务供应商。目前使用Astrea的产品已有超过21个生产工艺通过了FDA和EMA的批准。Astrea Bioseparations在全球拥有3个研发和生产基地，专注为生物大分子和CGT领域提供行业领先的层析介质和技术服务。Astrea Bioseparations推出的基于纳米纤维的新型层析技术，解决了传统生物分离工具载量低和工艺耗时问题，实现更快、更环保、更具成本效益的纯化过程，完全符合当今生物治疗创新的需求。 太阳集团tcy8722是Astrea Bioseparations中国区代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎随时拨打太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多信息。 参考文献：J. Kreusser et al., Influence of pH value and salts on the adsorption of lysozyme in mixed-mode chromatography, 2021R. Hess et al., Standardized method for mechanistic modeling of multimodal anion exchange chromatography in flow through operation, 2023 Technical Note: HCPURE™: A FIT FOR PURPOSE HOST CELL PROTEIN CLEARANCE SOLUTION IN E. COLI WORKFLOWS, Astrea BioseparationsTechnical Note: HCPure™ host cell protein clearance resin: Mixed mode chromatography as a means of process intensification, Astrea BioseparationsTechnical Note: HCPure™ host cell protein clearance resin: Mixed mode chromatography as a means of process intensification, Astrea BioseparationsTechnical Note: HCPURE™: HOST CELL IMPURITY REMOVAL IN CHO WORKFLOWS, Astrea BioseparationsTechnical User Guide: HCPureTM, Astrea Bioseparations 更多>

新品上市 | 耐高盐全能核酸酶DENARASE® High Salt

DENARASE® High Salt 是一种经过生物工程改造的野生型 Serratia marcescens 内切酶，通常用于生物工艺中的 DNA 去除。与野生型 DENARASE® 相比，该酶的几个氨基酸被替换以提高其耐盐性，而不会失去其对核酸的特异性。DENARASE® High Salt 在更广泛的盐浓度和 pH 范围内保持更高的活性，为客户提供了更大的工艺灵活性，同时为病毒载体制造工艺提升成本效益，尤其是在需要较高盐浓度的条件下。由于与野生型核酸内切酶具有很高的相似性，DENARASE® High Salt 可以使用与野生型酶相同的核酸内切酶 ELISA试剂盒进行检测，例如DENARASE® ELISA试剂盒，Cygnus核酸内切酶残留检测试剂盒（EonucleaseGTP ELISA，货号F960）。 DENARASE® High Salt的生产采用c-LEcta成熟的专利DENARASE®生产工艺，该工艺采用革兰氏阳性芽孢杆菌菌株（Bacillus.sp.）表达，大大降低了内毒素残留风险。该酶按照ISO 9001标准生产，不使用抗生素和动物源性原料或TSE/BSE风险原料。 DENARASE® High Salt酶特性 DENARASE® High Salt是专为在更高、与工艺相关的盐浓度下实现DNA清除活性而设计的。该工程酶在0-500 mM一价阳离子浓度范围内具有活性（见图1）。 图1. NaCl对酶活性影响 镁离子（Mg2+）是确保DENARASE® High Salt发挥酶活性所必需的辅因子。DENARASE® High Salt在低镁离子浓度（5-25 mM Mg2+）下具有基本活性，但在高镁离子浓度（>25 mM Mg2+）下酶活性会降低。因此，在使用DENARASE® High Salt时，应确保镁离子浓度在适当范围内（见图2）。 图2. Mg2+对酶活性影响 DENARASE® High Salt质量参数 DENARASE® High Salt产品为液体形式，配方为20 mM Tris-HCl（pH 7.4±0.2）、250 mM NaCl、5 mM MgCl2和50%（体积比）甘油。 项目 方法 质量标准 产品性状 直接观测 澄清透明液体 酶活性 光学测定1 >250 U/µL 纯度 SDS-PAGE和银染 ≥ 99% 比活性 光学测定单位蛋白具有的酶活性即280 nm下44,600 L x mol-1 x cm-1的摩尔消光系数 >5 x 105 U/mg 内毒素 LAL-Test，参考 Ph. Eur. 2.6.14, 方法C <0.25 EU/kU 总菌落数 TAMC/TYMC 参照 Ph. Eur. 2.6.12 需氧菌: < 5 cfu/200 µL 酵母: < 5 cfu/200 µL 1. Unit定义: 每个活性单位 (U) 是指在37 °C ，pH 8.0 条件下，在30分钟内将鲑鱼精DNA消化至相当于ΔA260nm值为1.0 的酸溶性寡聚核苷酸。 DENARASE® High Salt产品参数 分子量： 27 kDa 最适pH： pH 7.4 - 9.0 最适反应温度：37 °C 等电点(pI)：7.831 辅因子：Mg2+ DENARASE® High Salt订购信息 品名 货号 规格 DENARASE High Salt 25 kU 22002-25k 25 kU DENARASE High Salt 100 kU 22002-100k 100 kU DENARASE High Salt 500 kU 22002-500k 500 kU DENARASE High Salt 1000 kU 22002-1000k 1000 kU DENARASE High Salt 5000 kU 22002-5000k 5000 kU 关注太阳集团tcy8722微信公众号（微信号：xmjsci），回复“核酸酶试用”，填写表单即可申请c-LEcta DENARASE® High Salt免费试用机会，数量有限，先到先得！ 如需了解更多信息，欢迎致电c-LEcta中国区代理北京太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com获取更多资料。 更多>

星品推荐 | Agrisera植物通用抗体（Global antibodies）

通用抗体（Global antibodies）是Agrisera公司针对植物蛋白中保守的氨基酸序列设计的一系列抗体。这些抗体的显著优势在于它们能够跨不同物种准确识别目的蛋白，并且可以通过标准品实现对蛋白的精确定量分析，这些抗体具备广泛的适用性，能够检测包括高等植物、苔藓、藻类以及硅藻在内的多物种中的相同蛋白。无论是在标准品还是待测样本中，这些抗体都能一致识别特定蛋白区域，从而确保实验结果的高可靠性和准确性，为研究人员提供极为方便的选择。通用抗体的应用 • 从一系列来源，包括蓝藻，浮游植物或未表征的植物中检测目的蛋白 • 从不同光合水平来源的浮游植物群落的光合蛋白混合样本中检测环境适应性 • 预测群落中主要光合作用和生物合成过程的最大能力 Agrisera部分通用抗体产品 产品名称 货号 实验类型 AOX1/2 | Plant alternative oxidase 1and 2 AS04 054 IL,WB AtpB | Beta subunit of ATP synthase AS05 085-10 IF,WB Cat | Catalase (peroxisomal marker) AS09 501 IL,IG,IP,WB FtsZ2 | Plant cell division proteinftsZ2 AS13 2651 WB GLN1 GLN2 | GS1 GS2 glutaminesynthetase global antibody AS08 295 WB GlnA | Glutamine synthetase AS01 018 WB GOGAT | Glutamine oxoglutarateaminotransferase AS07 242 WB H+ATPase | Plasma membrane H+ATPase AS07 260 IF,IL,WB HSP70 | Heat shock protein 70 AS08 371 IP, WB NifH | Nitrogenase iron protein AS01 021A IF,IHC,WB PEPC | Phosphoenolpyruvatecarboxylase AS09 458 IL,WB PetC | Rieske iron-sulfur protein of Cyt b6/fcomplex AS08 330 BN-PAGE,WB PsaB | PSI-B core subunit ofphotosystem I AS10 695 BN-PAGE,WB PsbA | D1 protein of PSII,C-terminal(thylakoid membrane marker) AS05 084 IF,IG,WB RbcL | Rubisco large subunit AS03 037 IF,IG, TP, WB PsaC | PSI-C core subunit ofphotosystem I AS10 939 WB SPS | Sucrose phosphate synthase,global AS03 035A WB 如需了解更多Agrisera通用抗体请点击这里。 部分应用案例展示 RbcL | Rubisco large subunit, form I (rabbit)，AS03 037 GlnA | Glutamine synthetase，AS01 018 HSP70 | Heat shock protein 70 (cytoplasmic)，AS08 371 太阳集团tcy8722代理的瑞典Agrisera公司自1980年成立以来，一直专注于开发高质量的植物单克隆和多克隆抗体，并以其卓越的研发实力和生产技术，在全球植物抗体领域占据着领导地位。其产品线覆盖了广泛的物种范围，在Agrisera的产品目录中包含了众多模式植物和重要农作物，如拟南芥、水稻、小麦、玉米和番茄等超过三十种植物，满足各类植物学研究需求的广泛抗体库。有众多已发表文献支持，确保研究结果的准确性和可靠性。太阳成集团tyc234cc是Agrisera品牌中国区代理，致力于为国内广大科研工作者提供优质的免疫学产品和服务。如果您对上述产品感兴趣，欢迎致电太阳集团tcy8722全国客服热线400-050-4006或登录官方网站www.xmjsci.com了解更多信息。参考文献： Analyzing photosynthetic complexes in uncharacterized species or mixed microalgal communities using global antibodies. Physiologia Plantarum, 2003: 119:322-327. 更多>

Pfanstiehl 喜获第15个CDE登记号- 氨丁三醇Tris Base

“ 热烈祝贺Pfanstiehl 2023年推出的新品氨丁三醇Tris Base喜获CDE登记号F20240000172. 这是Pfanstiehl产品获得的第15个CDE登记号！”Tris Base是一种应用非常广泛的有机试剂。它及其衍生物被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备，可用于药物生产、有机合成、生物缓冲剂等。Moderna新冠疫苗处方的披露显示出Tris可作为极佳的mRNA-LNP复合体缓冲液，引起大家对Tris作为蛋白或核酸类药物缓冲体系的关注和兴趣。Pfanstiehl秉承一贯高品质理念，于2023年11月重磅推出的注射级别Tris Base T-153, 具有高纯度，超低内毒素，超低金属杂质残留的特点，并且新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶和脂肪酶等多项质量指标的检测，符合多国药典规定（USP, EP, BP, ChP），可用于生物治疗性药物和疫苗的生产。产品信息： · 产品名称: Tris Base, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals· 中文名称：三羟甲基氨基甲烷· 分子式：C4H11NO3· 分子量：121.14g/mol· CAS号：77-86-1· 产品货号：T-153产品特点：· 高纯度，超低内毒素，超低微生物含量，超低金属杂质残留· 质量指标新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶，脂肪酶的检测· 符合多国药典：USP, EP, BP, ChP· 符合ICH Q3D标准DNA· 符合GMP标准· CDE登记号：F20240000172产品应用：· 缓冲液Pfanstiehl Inc.全产品系列如下，欢迎联系Pfanstiehl中国区代理太阳成集团tyc234cc获取100g装免费样品。太阳成集团tyc234cc为Pfanstiehl中国代理，为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打太阳集团tcy8722客服电话400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>

蛋白结晶研究入门全攻略：轻松开启生命科学探索之旅

蛋白质结晶是研究蛋白质结构和功能的关键手段，对理解生物大分子作用、疾病机制及药物开发至关重要。它涉及蛋白质分子在溶液中规则堆积形成有序晶体的过程，受蛋白质纯度、浓度、缓冲液成分等多种因素影响。为获高质量晶体，需进行样品制备、条件筛选与优化等。蛋白结晶研究推动生物学和医学领域发展，支持药物设计和蛋白质工程。本文概述了蛋白质结晶的制备、方法、筛选、优化等要点，为相关研究提供参考。 一 蛋白质晶体的发展史 蛋白质晶体的研究始于19世纪中期，Hunefeld首先报道了血红蛋白晶体。到了20世纪，结晶技术成为提纯和研究蛋白质的重要方法，特别是John Jacob Abel对胰岛素的结晶，以及James B. Sumner对酶作为晶体蛋白质的确认。1930年代末，蛋白质晶体开始用X射线分析，开启了结构生物学的新篇章。随着遗传学和分子生物学的发展，特别是DNA技术的应用，蛋白质晶体的研究在1980年代后得到了极大的加速和变革。 二 蛋白结晶：艺术与科学的结合 尽管现代分子生物学和晶体学的进步为许多实验提供了便捷，但蛋白质结晶仍然是一个既简单又复杂的挑战。这一过程结合了科学的方法与艺术般的直觉和创造力，然而又高度依赖经验的积累。 由于生物大分子（如蛋白质）由大量不同原子以复杂方式组合，结晶过程中存在诸多变量和影响因素。这些因素包括蛋白质纯度、浓度、pH值、离子强度等，每一个变量都可能对结晶结果产生显著影响（表1和2）。 表1. 影响蛋白质晶体生长的化学变量 样品的纯度 基因修饰 样品的构象灵活性 分子的对称性 样品的均一性 样品的稳定性和变性程度 PH值和缓冲液 等电点 沉淀剂的类型和浓度 存在his标签和其他纯化标签与否 样品的浓度 热稳定性 添加剂、辅助因子、配体、抑制剂、效应剂和辅料 PH稳定性 混沌剂，如尿素、盐酸胍、硫酸铵等 样本的获取、处理、保存等历史过程 洗涤剂 蛋白水解 金属离子 微生物污染 离子强度 样品保存 还原剂或氧化剂 样品处理及相关的清洁度 样品是来源 阴、阳离子类型及浓度 无定形颗粒物质 相对过饱和度 翻译后修饰 其他试剂的初始浓度和最终浓度 化学修饰 平衡的路径和速率 表2.可能或确实影响蛋白质晶体生长的物理变量 温度 电磁场 平衡速率 结晶装置的表面 结晶方法 试剂的粘度 重力、对流和沉降 异质和外延成核剂 振动和声音 结晶装置的几何形状 样品和试剂的体积 时间 压力 试剂的介电性能 结晶实验通常从筛选开始，旨在找到能产生晶体的关键变量组合。然而，为了获得具有特定特性的晶体（如用于结构生物学、纯化或生物治疗研究），往往需要进一步的优化实验（表3和表4）。 表3.结晶方法-过饱和度的实现 气相扩散法(Sitting, Hanging, Sandwich) 序列提取（数据处理和分析技术） 分批结晶法(微分批结晶) pH诱导（简单、可控） 透析技术 (微透析技术发挥辅助作用) 温度诱导（操作简便、成本较低，需与其他方法结合使用） 自由界面扩散(逆扩散, 液桥) 效应物添加(也加Silver Bullet) 控制蒸发 表4.蛋白质结晶所用试剂 盐类 (硫酸铵、甲酸钠、磷酸铵等) 非挥发性有机物((±)-2-甲基-2,4-戊二醇、1,6-己二醇、甘油等) 聚合物 (聚乙二醇、分子量范围在200到20,000之间、乙烯亚胺、杰凡尼®等) 缓冲液 (HEPES、Tris、醋酸钠、MES等) 挥发性有机物 (2-丙醇、1,4-二氧六环、乙醇等) 添加剂 (氯化钙、氯化钠、三(2-羧乙基)膦、n-辛基-β-D-葡糖苷等) 尽管现代技术提供了丰富的资源和工具，但结晶并非仅仅是使用这些工具那么简单。成功的结晶策略需要基于一些基本原则，正如Alex McPherson等结晶领域的先驱所提出的，在进行实验之前，考虑这些原则将为您的结晶工作提供坚实的基础。 三 蛋白结晶的关键要素 样本：样本的纯度是结晶成功的基石，需细致处理以保证样本高均一性。 均一性：蛋白质样品的化学结构和分子量的一致性对形成有序晶体至关重要。 溶解度：优化样本在缓冲液中的溶解条件，追求单分散性，避免聚集和沉淀。 稳定性：确保蛋白质在结晶过程中保持结构和功能稳定，避免变性。 超饱和：通过控制超饱和度，诱导蛋白质分子有序排列形成晶核。 缔合：调控蛋白质分子间的有序相互作用，促进有序聚集，避免非特异性聚集。 成核：控制溶液中蛋白质初始结晶核的形成，以优化晶体数量、大小和质量。 多样性：尝试多种方法和条件来发现适合特定蛋白质的结晶条件。 控制：精确调控实验条件和过程，确保实验结果的准确性和可重复性。 杂质：保持样品纯度，减少杂质对结晶和后续研究的干扰。 保存：妥善保护结晶出的蛋白质晶体，防止其受到损害，确保后续研究的可靠性。 太阳集团tcy8722代理的美国Hampton Research公司是一家专注于蛋白质晶体研究的领先生产商，其广泛的产品组合涵盖了从结晶初步筛选到结晶优化筛选，再到定制单组分结晶试剂和结晶生长优化试剂等全方位产品。这些产品能够满足不同蛋白结晶研究的需求，包括普通蛋白、膜蛋白以及蛋白复合体的结晶。 太阳集团tcy8722代理的Hampton Research以其尖端的生物大分子结晶技术和实用丰富的产品线，为全球晶体研究人员提供了全面的晶体研究试剂和实验耗材。这些产品不仅极大地提升了科研人员的工作效率，而且帮助他们取得了卓越的科研成果，Hampton Research已成为晶体研究领域备受信赖的品牌之一。太阳集团tcy8722Hampton Research蛋白结晶热销产品 Hampton Research蛋白结晶筛选试剂盒 品牌 货号 品名 规格 简介 Hampton HR2-144 Index 10ml, tube format 蛋白质、络合物、多肽、核酸和水溶性小分子等多种试剂体系的经典结晶条件初筛选试剂盒，包含96个条件 Hampton HR2-110 Crystal Screen 10 ml, tube format 蛋白、可溶性多肽、核酸和水溶性小分子等多种试剂体系结晶条件初筛试剂盒，包含50个条件 Hampton HR2-112 CrystalScreen 2 10ml, tube format 蛋白、可溶性多肽、核酸和水溶性小分子等多种试剂体系结晶条件初筛试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-114 MembFac 10 ml, tube format 适用于膜蛋白的结晶条件初筛试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-116 Natrix 10ml, tube format 核酸、核酸/蛋白质复合物结晶条件初筛试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-117 Natrix 2 10 ml, tube format 核酸、核酸/蛋白质复合物结晶条件初筛试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-082 PEGRx1 10ml, tube format 聚合物和pH条件初筛与二次筛选试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-084 PEGRx 2 10 ml, tube format 聚合物和pH条件初筛与二次筛选试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-126 PEG/IonScreen 10ml, tube format 聚合物、盐和pH条件初筛与二次筛选试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-098 PEG/Ion 2 Screen 10 ml, tube format 聚合物、盐和pH条件初筛与二次筛选试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-107 SaltRx1 10ml, tube format 盐和pH条件初筛与二次筛选试剂盒，包含48个条件 Hampton HR2-109 SaltRx 2 10 ml, tube format 盐和pH条件初筛与二次筛选试剂盒，包含48个条件 除上述产品外，太阳集团tcy8722还提供包括GRAS Screen™、Grid Screen系列、Low Ionic Strength Screen、XP Screen、JBScreen Wizard等等在内的多种结晶条件筛选试剂盒，欢迎致电太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006咨询订购。Hampton Research蛋白结晶优化试剂盒 品牌 货号 品名 规格 简介 Hampton HR2-072 Solubility& Stability Screen 0.5ml, Deep Well block format 溶解度和稳定性筛选，包含96个条件 Hampton HR2-413 Solubility & StabilityScreen 2 0.5 ml, Deep Well blockformat 溶解度和稳定性筛选，包含96个条件 Hampton HR2-070 SlicepH 0.5ml, Deep Well block format pH筛选试剂盒，包含96个条件 Hampton HR2-138 Additive Screen 1 ml, Deep Well blockformat 添加剂筛选试剂盒，包含96个条件 Hampton HR2-459 GRASAdditive 1ml, Deep Well block format GRAS添加剂筛选，包含96个条件 Hampton HR2-096 Silver Bullets 0.50 ml, Deep Well blockformat 添加剂筛选试剂盒，包含96个条件 Hampton HR2-407 DetergentScreen 0.25ml, Deep Well block format 洗涤剂筛选试剂盒，包含96个条件 Hampton HR2-214 Ionic Liquid Screen 0.5 ml, tube format 离子液体筛选试剂盒，包含24个条件 Hampton HR2-241 StockOptionspH 10ml, tube format 晶体生长筛选试剂盒，包含45个条件 Hampton HR2-235 StockOptions Sodium Citrate 10 ml, tube format 晶体生长筛选试剂盒，包含24个条件 Hampton HR2-239 StockOptionsSodium Cacodylate 10ml, tube format 晶体生长筛选试剂盒，包含24个条件 Hampton HR2-243 StockOptions MES 10 ml, tube format 晶体生长筛选试剂盒，包含20个条件 Hampton HR2-103 StockOptionsBis-Tris Propane 10ml, tube format 晶体生长筛选试剂盒，包含33个条件 Hampton HR2-102 StockOptions HEPES 10 ml, tube format 晶体生长筛选试剂盒，包含15个条件 Hampton HR2-227 StockOptionsPolymer 10ml, tube format 晶体生长筛选试剂盒，包含23个条件 Hampton HR2-245 StockOptions Salt 10 ml, tube format 晶体生长筛选试剂盒，包含49个条件 Hampton HR2-073 CryoPro 1ml, tube format 晶体冷冻保护剂筛选，包含48个条件 Hampton HR2-501 50% v/v Jeffamine® M-600® pH 7.0 200 ml 结晶级Jeffamine M-600用于结晶条件优化 Hampton HR2-525 50%w/v Polyethylene glycol 1,500 200mL 结晶级PEG 1500用于结晶条件优化 Hampton HR2-527 50% w/v Polyethylene glycol3,350 Monodisperse 200 mL 结晶级PEG 3350用于结晶条件优化 Hampton HR2-529 50%w/v Polyethylene glycol 4,000 200mL 结晶级PEG 4000用于结晶条件优化 以上试剂盒中的单组分条件可单独订购。除上述试剂盒外，太阳集团tcy8722还提供包括Proti-Ace™、Silica Hydrogel Kit、Heavy Atom Screens、I3C Phasing Kit等多款结晶优化筛选试剂盒及试剂，欢迎致电太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006咨询订购。Hampton Research蛋白结晶耗材工具 品牌 货号 品名 规格 简介 Hampton HR2-320 SeedBead Kit 24tubes with PTFE Seed Bead 晶种制备珠 Hampton HR3-105 MASTERBLOCK® 96 Deep Wellpolypropylene plate 50 plate case 96孔深孔板 Hampton HR3-081 72Well Microbatch Plate, Greiner 654102 untreated,hydrophobic - 270 plate case 72孔油下结晶板 Hampton HR3-125 Swissci 3 Well MidiCrystallization Plate in UVP (40) 40 plate case 3微孔/96孔坐滴板 Hampton HR3-158 CryschemPlate 24plate case 24孔坐滴板 Hampton HR3-231 22 mm x 0.22 mm Siliconizedcircle cover slides 1.0 ounce pack (~120slides) 圆形硅化玻璃盖玻片 Hampton HR3-233 22mm x 0.22 mm Siliconized circle cover slides 10.0ounce case (~1,200 slides) 圆形硅化玻璃盖玻片 Hampton HR3-609 Crystal Clear Sealing Film 100 pack 结晶板封口膜 Hampton HR4-216 CrystalCrusher 5pack 晶体粉碎器 Hampton HR4-217 Crystal Probe 12 pack 一次性不锈钢晶体针 Hampton HR4-733 CrystalCap withVial - 60 pack 晶体环底座 Hampton HR4-811 Micro-Tools Set each 晶体处理工具套装，含8个不同形状的晶体探针 除上述产品外，太阳集团tcy8722还提供各种规格结晶板、loop、微桥、密封胶，Pucks等工具耗材及整套工具箱，帮助研究人员更快更高效的开展实验。欢迎致电太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006咨询订购。 太阳集团tcy8722作为Hampton Research在中国的官方授权代理，致力于为用户提供卓越的技术支持和周到的售后服务。太阳集团tcy8722始终秉持“We promise what we can do. We do what we have promised”的核心理念，为用户提供优质的服务。若您想了解更多产品信息，欢迎致电北京太阳集团tcy8722全国客服热线400-050-4006或登录官网www.xmjsci.com进行查询和了解。 References and Readings 1.Der Chemismus in der tierescher Organization, Hunefeld, F 1. (1840)p.160.Leipzig University, Germany. 2.A brief h istory of protein crystal growth, MePherson, A. (1991). J. Cryst.Growth, 110,1-10. 3 über die Eiweisskorper verschiedenen Oelsamen, Ritthausen, H. (1880)Pfluegers Arch. 21,81-104. 4 The proteins of the Brazil nut, Osborne T.(1891). Am. Chem. J. 13,212-218. 5 Crystalline insulin., Abel, 」.J., Geiling, E. M. K., Roultier, O. A., Bell, F. M.&Wintersteiner, 0.(1927).]. Pharmacol. Exp. Ther. 31,65-85. 6 The Enzymes, Sumner, J.B.& Somers, G.F(1943). New York: Aca-demic Press. 7 Crystalline enzymes, Northrop, M., Kunitz, M. & Herriott, R. M. (1948)New York: Columbia University Press. 8 Present at the flood: How structural molecular biology came about,Dickerson,R.E.(2005).FASEB J.20,809-810. 9 Preparation and Analysis of Protein Crystals, McPherson, A.(1982)New York: lohn Wiley & Sons. 10.Current approaches to macromolecular crystallization. McPherson, A. (1990).Eur.Biochem.189,1-23. 11.Crystallization of Biological Macromolecules, McPherson, A.(1999)Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 12Introduction to protein crystallization, McPherson, A. and Gavira, J.A.(2014) Acta Crystallographica F, Volume 70, Part 1, 2-20. 13.Some Words of Advice from an Old Hand, Alexander McPherson, pages1-9, in Protein Crystallization, Second Edition, Edited by Terese Berg-fors. International University Line, 2009. 更多>

Cygnus新品上市 | BL21(DE3)宿主细胞蛋白检测试剂盒

在BL21(DE3)大肠杆菌中进行重组表达，是常用的生产治疗性蛋白的有效且经济的手段。然而，制造和纯化过程中可能会受到BL21(DE3)大肠杆菌菌株中宿主细胞蛋白（HCPs）的污染，这一情况需严格控制。降低HCP杂质至最低水平，满足法规要求，是一项重要的监管任务。 Cygnus最新推出的BL21(DE3) HCP Elisa检测试剂盒（货号F1060），正是为此目的而设计，适用于纯化工艺开发与优化、过程控制、常规质量控制和产品放行等检测。‌ 特点与优势： 基于广泛反应的抗BL21(DE3) HCP抗体，通过抗体亲和纯化和质谱测定（AAE-Mass），可检测超过90%的HCP。 具有高特异性和高灵敏度（LOD约0.4 ng/ml，LLOQ约3 ng/ml），且重复性良好。 一步法检测，可在3小时内得到实验结果。 产品信息 产品名称 中文名称 货号 规格 LOD LLOQ BL21(DE3) HCP ELISA Kit BL21(DE3)宿主细胞蛋白检测试剂盒 F1060 1 kit 0.4 ng/mL 3 ng/mL Cygnus BL21(DE3)宿主细胞蛋白检测试剂盒，一款强大而可靠的工具，能帮助您应对多样化的HCP杂质控制需求，确保生产过程的合规性，如需了解更多信息，欢迎联系销售人员或致电太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006。 Cygnus宿主细胞蛋白（HCP）检测系列 Cygnus Technologies, LLC.为生物技术和生物制药行业提供产品和分析方法，旨在加速研发阶段和提高产品质量。Cygnus开发和生产的生物工艺残留试剂盒，用于检测超过50种不同表达系统的特异性杂质。Cygnus作为专注于生物技术应用免疫检测的高灵敏度分析技术的专家，Cygnus的产品和服务已经被几乎所有主要的生物制药公司使用超过25年。 太阳成集团tyc234cc作为Cygnus在中国总代理，与国内众多知名药企，CRO/CMO企业建立了长久稳定的合作关系。多年来太阳集团tcy8722的产品及服务帮助许多企业加速R&D阶段，提高药物质量、纯度和安全，加速优化研发工艺，减少产品上市时间，降低QC成本。 更多>

Pfanstiehl 麦芽糖一水合物喜获第14个CDE登记号

“ 热烈祝贺Pfanstiehl 麦芽糖一水合物喜获CDE登记号F20240000124. 这是Pfanstiehl产品获得的第14个CDE登记号！” 麦芽糖（Maltose)是一种二糖，由两个葡萄糖分子以α-1,4糖苷键连接而成。10%麦芽糖的溶液为等渗液，静脉注射给药时，被α-葡苷酶分解为两分子的葡萄糖，代谢后为肌体提供能量，对血糖水平影响很低。因此，在以蛋白质为主要成分的静脉注射制剂中，麦芽糖通常作为稳定剂发挥作用。由于麦芽糖可不依赖胰岛素而进入细胞，它的代谢不会影响到血液中葡萄糖的浓度，因此在糖耐量降低的患者中仍可安全使用。 麦芽糖分子式（图片来源www.yunkp.com） Pfanstiehl秉承一贯高品质理念，重磅推出的GMP级别麦芽糖一水合物, 具有超高纯度，超低内毒素，超低β-葡聚糖，超低微生物含量, 超低金属杂质残留(ppb级别)的特点，符合多国药典规定（USP, EP, BP, ChP），可用于生物治疗性药物和疫苗的生产。 产品信息： · 产品名称: Maltose Monohydrate. High Purity, Low Endotoxin, Low Metals · 中文名称：麦芽糖一水合物 · 分子式：C12H24O12 · 分子量：360.31g/mol · 产品货号：M-167 · DMF：028980 · CDE：F20240000124 产品特点： · 高纯度，低内毒素，低微生物含量，低β-glucan，低金属杂质残留 · 符合多国药典：USP, EP, BP, JP, ChP · 符合ICH Q3D标准 · 符合GMP标准 · 植物源 产品应用： · 蛋白质稳定 · 血液分离 · 防止IVIG溶液中的蛋白质聚集 如果您对Pfanstiehl的麦芽糖一水合物M-167感兴趣，可联系Pfanstiehl中国区代理太阳集团tcy8722科技获取详细的产品概况说明文件如下。也欢迎联系获取测试样品。 Pfanstiehl Inc.产品系列如下，欢迎联系Pfanstiehl中国区代理太阳成集团tyc234cc获取100g装免费样品。 太阳成集团tyc234cc为Pfanstiehl中国代理，为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打太阳集团tcy8722客服电话400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>

Mirus Label IT®——高效、一步法用于体内和体外核酸标记的新技术

细胞转染在科学研究中扮演着十分重要的角色，但也是最容易被忽略的一环。转染效率的高低不仅影响实验结果，甚至可能导致得到的实验结果是无效的。在多种类型核酸的细胞转染实验中，研究者们常需要进一步优化转染条件以达到最优的转染效率，特别是较难转染的细胞，而针对特定细胞类型选择对应专业化的转染试剂只是迈向转染实验成功的第一步。 成立于1995年的Mirus Bio，专注及深耕核酸递转领域多年，从最早具有低毒性的TransIT ® -LT1到GMP级别、可用于AAV和LV生产的TransIT-VirusGEN® (产品年鉴请见图1)。直至文稿发布时，使用Mirus产品发表文章已超过1万篇，并且发表文章及Mirus数据库涵盖了超过1200种细胞类型。 图1 Mirus产品年鉴 在细胞转染实验中，研究者们常常会忽略转染效率/成功率的评估，那么是否有对应技术或者方法允许实时监测DNA/RNA的成功递送以及细胞内的分布状态呢？Mirus Bio Label IT® 核酸标记试剂盒为广大的科研工作者提供了一个方向。Label IT® 核酸标记试剂盒可对任何类型核酸，进行高效、直接的标记，并且为on-step的实验操作。基于非酶反应的标记方法，在不损伤核酸完整性、不影响基因表达的前提下，将选择的标记 (荧光、生物素、地高辛等)以共价的方式连接到核酸上。 Label IT® 试剂盒有多种标签可供选择，包括 Cy®3、Cy®5、CX-罗丹明、TM-罗丹明、荧光素、MFP488、地高辛、生物素和二硝基苯基(DNP)。Label IT® 核酸修饰试剂盒（胺）也可用于基于胺的功能基团进行DNA或RNA修饰。产品特点如下： 可用于标记任何DNA或RNA模板——适用于多种应用 (In vitro & in vivo)，如Crispr基因编辑、核酸递转、RNA干扰/表达实验、FISH、Microarray等； 一步法标记——简单、轻松即可完成稳定的模版标记反应； 可根据实验需求或应用，调节标记的密度——以获得最佳检测标记 DNA 或RNA 的灵敏度； 基于共价化学反应——对核酸残基的修饰为永久性、无损伤的，是多种科研应用的理想选择。 什么是核酸标记？如何标记核酸？如何检测？ 绝大多数基于分子和生物学的In vitro 及 in vivo研究都依赖于核酸的标记或标签，理想情况下，此类标记或标签不会影响核酸功能以及研究结果。因此，也发展出来多种核酸标记方式，大致可以归为以下两类： -      化学标记法：基于结合核酸的反应基团，比如Mirus Label IT® 核酸标记试剂盒属于此类，并且整个反应过程并不需要酶的参与。 Label IT® 化学标记试剂由三个部分组成（如图2）： (1)      标签/标记 (绿色区域)； (2)      Linker，与核酸进行静电相互作用 (黄色区域)； (3)      Label IT® 试剂以共价形式连接到核酸中活性杂原子的烷基化基团(蓝色区域)。 图2. Label IT®标记分子示意图 -      基于酶反应标记法：通过酶促反应，在该反应过程中加入标记修饰的核酸。 当待研究的核酸加入标记后，可通过以下两种方式进行检测： -      直接检测：这时，标记的核酸中包含了可用于光学、发光或产生荧光信号的报告分子。 -      间接检测：标记的核酸带有标签或标记，该标记需要特异性的结合报告偶联分子，如生物素结合带有荧光标记的链霉亲和素，地高辛结合带有荧光标记的特异性抗体等。 Label IT® 核酸标记试剂盒——不改变核酸结构功能 基因沉默相关功能研究在分子和细胞生物学中发挥着重要作用，化学转染也在该研究领域扮演者重要角色。小干扰 RNA (Small interfering RNAs, siRNA)，常作为研究各种类型细胞中蛋白功能核酸类型，通过有效的knockdown从而影响基因表达。那么，加入Label IT®标记的核酸，是否会改变核酸结构，从而影响到后续实验结果呢？ 评估测试使用Label IT® siRNA Tracker™ 试剂盒，将相同siRNA加入不同标记 (CyTM3, CyTM5, 荧光素, CX-罗丹明 )以及没有标记siRNA，转染后，可通过荧光显微镜观察到带有标记的siRNA。基因表达结果显示，带有不同标记的siRNA，其目的基因表达水平近似，意味着加入Label IT®标记的核酸，并不影响目的基因表达及功能 (图3)。 图3  Label IT® siRNA Tracker™ 试剂盒评估测试 Label IT® 核酸标记试剂盒——前沿应用举例 应用一：使用Label IT®技术，富集CRISPR'd细胞 Nasri 和 Mir 等人在文章中阐述了如何通过 Label IT® 技术，富集 CRISPR/Cas编辑成功的细胞。基因组编辑实验面临最大的挑战之一是如何从未编辑的细胞中成功的筛选/富集出成功编辑的细胞，特别当未被编辑的细胞相对于成功编辑的细胞，具有生长/增殖优势，使得细胞筛选变得更加困难。 为了高效的区分经过基因编辑及未编辑的细胞，作者在CRISPR引导RNA ( gRNA) 与 Cas9 形成复合物及转染细胞前，使用Label IT®对gRNA进行了荧光标记，实验流程示意图如下： 研究结果表明，使用Label IT®标记的gRNA 不会影响基因编辑效率，并且可通过荧光分选/富集成功编辑的细胞群。进一步地，研究者们将该 CRISPR 实验流程应用于针对多种细胞类型的GADD45B基因编辑实验。根据细胞类型的不同，经过Label IT®标记的细胞亚群中，其成功编辑细胞占比相对于总细胞群体提了15-40%。 发表文章信息： 标题: Fluorescent labeling of CRISPR/Cas9 RNP for gene knockout in HSPCs and iPSCs reveals an essential role for GADD45b in stress response 作者: Masoud Nasri, Perihan Mir et al. 杂志: Blood Adv, Volume 3(1), Jan 2019. DOI: 10.1182/bloodadvances.2017015511 应用二：使用Label IT®技术，聚焦于免疫系统研究 Label IT® 核酸标记技术可用于一种新型疫苗注射方法-微针阵列(microneedle array, MNA)的表征研究。传统的疫苗注射方法是通过 3 厘米以上长度的针头进行皮下注射，而微针阵列则是由微米级针头所组成(示意图如下)，以无痛的方式细微的的穿透皮肤，进入到富含免疫细胞群，可减少患者的不适感。 为了提高疫苗的效力(efficacy)，通常会将免疫刺激分子或 "激动剂(agonists) "与疫苗的靶标或抗原一同加入疫苗制剂中。Edwards 等人的研究表明，双链 polyIC RNA 和单链 CpG DNA 寡核苷酸可作为微阵列中的激动剂(agonists)。并且，研究者们认为带负电荷的核酸激动剂(agonists)和带正电荷的抗原之间的静电相互作用，帮助了微阵列的组装。通过使用 Label IT® Cy®3 和 Cy®5 ，分别针对以上两种核酸类型进行荧光标记，方便用于查看标记核酸在微针上的分布，这样就允许了研究者们按照所需要的特定比例，将两种激动剂均一的加入到微阵中，从而使得精确的调整微针阵列 MNA 疫苗的免疫反应成为可能。 发表文章信息： 标题: Tuning innate immune function using microneedles containing multiple classes of toll-like receptor agonists 作者: Camilla Edwards, Robert Oakes et al. 杂志: Nanoscale, Volume 15, Apr 2023. DOI: 10.1039/D3NR00333G Label IT® 核酸标记试剂盒-产品选择 Label IT®试剂盒共有以下四种形式可供选择，以应对研究人员核酸标记实验的不同应用场景需求： Label IT® Nucleic Acid Labeling Kits Label IT®Tracker™ Intracellular Nucleic Acid Localization Kits Label IT® siRNA Tracker™ Intracellular Localization Kits Label IT® Nucleic Acid Modifying Kits 下表总结了不同种类Label IT®试剂盒区别： Label IT® Nucleic Acid Labeling Label IT® Tracker™ Label IT® siRNA Tracker™ Label IT® Nucleic Acid Labeling Modifying 应用 in vitro & in vivo应用的多种类型核酸标记 in vitro & in vivo质粒追踪实验 in vitro & in vivo siRNA追踪实验 DNA氨基修饰 试剂盒组分 Label IT® Reagent Reconstitution Solution 10X Labeling Buffer Reagent D1& Buffer N1 G50 Microspin Columns Label IT® Reagent Reconstitution Solution 10X Labeling Buffer Label IT® Reagent Reconstitution Solution 10X Labeling Buffer siRNA Dilution Buffer Label IT® Reagent Reconstitution Solution 10X Labeling Buffer Reagent D1& Buffer N1 G50 Microspin Columns Label IT® : 核酸比例 1 µl  : 1 µg 0.5 µl  : 1 µg 1 µl  : 1 µg 0.5 µl  : 1 µg 标记密度 每20-60 bp 1个标记 每60-140 bp 1个标记 每15-40 bp 1个标记 每20-60 bp 1个标记 标记物类型 Cy®3 Cy®5 荧光素 CX-罗丹明 TM-罗丹明 生物素 MFP488 地高辛 DNP Cy®3 Cy®5 荧光素 CX-罗丹明 TM-罗丹明 生物素 Cy®3 Cy®5 荧光素 CX-罗丹明 TM-罗丹明 生物素 氨基 试剂盒规格 25 µl 100 µl 50 µl 50 µl 25 µl 100 µl 更多有关产品常疑问FAQ，请查看官网链接 Label IT® 核酸标记试剂盒-实验优化之核酸标记密度 理想的密度取决于被标记的核酸类型及下游应用。在需要直接追踪核酸的实验中，更适合较高的核酸标记密度；而在想要维持/完整的还原标记核酸的生物学功能的实验中，则更加适合较低的标记密度。使用 Label IT® 核酸标记技术，可以轻松调整到理想的标记密度。 Label IT® 试剂与核酸的比例(v:w)的改变与标记密度呈线性相关性(图 4)。例如，按照说明的初次实验建议，需加入 5 µl Label IT® 试剂标记 5 µg DNA，此时v:w比例为1:1。在保证孵育时间和 DNA 量不变的条件下，如将 Label IT® 试剂的量降低为 2.5 µl 或 增加到10 µl，标记密度将分别降低一半或增加一倍。 实验Tips：使用过高的 Label IT® 试剂量（超过建议量的 4 倍），可能会导致核酸裂解或引起 Label IT® 荧光基团淬灭。 核酸标记密度与所使用的 Label IT® 试剂量及反应的孵育时间呈正线性相关。可通过调整反应中 Label IT® 试剂的用量或反应的孵育时间 (孵育温度仍为37℃)，可轻松灵活的调整到所需要的理想标记密度。 图4. 核酸标记密度与Label IT®试剂用量和反应孵育时间成正比 实验Tips：如何计算核酸标记密度，详细实验步骤及方法请见“Calculate Nucleic Acid Labeling Density”。 Mirus Bio公司介绍 Mirus成立于1995年，始终秉承着为基因递转提供最佳方法及最高效的工具。凭借超过 25 年转染领域的深根细作，获得了多项技术突破，已成为核酸递送领域的全球领导者和值得信赖的品牌。Mirus科学家团队不断突破转染技术的极限，推出了VirusGEN®转染试剂与RevIT™增强剂，进一步提升AAV/Lv产量，助力推动生物治疗药物的降本增效，为CGT领域客户赋能。 太阳成集团tyc234cc是Mirus中国区总代理，始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务，Mirus热销转染产品常备现货。如果您对上述产品感兴趣，欢迎致电北京太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多产品信息。 更多>

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